大鼠F-框蛋白32(FBXO32)ELISA试剂盒
简介
F-框蛋白32（FBXO32），也被称为 MAFbx，表示“肌肉萎缩F-box基因”，是由FBXO32基因编码的蛋白质，该基因编码F-box蛋白家族的成员，其特征在于大约40个氨基酸基序F-box，F-box蛋白构成称为SCF(SKP1-cullin-F-box)的泛素蛋白连接酶复合物的四个亚基之一，其在磷酸化中起作用依赖性泛素化，F-box蛋白分为3类：包含WD-40结构域的Fbws、 包含富含亮氨酸重复序列的Fbls和包含不同蛋白质-蛋白质相互作用模块或 没有可识别基序的Fbxs，该基因编码的蛋白质属于Fbxs类，含有一个F-box结构域，这种蛋白质在肌肉萎缩期间高度表达，而缺乏这种基因的小鼠被发现对萎缩有抵抗力，因此，这种蛋白质是治疗肌肉萎缩的潜在药物靶点，该基因的可变剪接导致两个转录变体编码两种不同大小的同工型。
本试剂盒大鼠FBXO32免疫测定是一种三步法固相夹心ELISA，用于测量细胞培养上清液、血清和血浆中的大鼠FBXO32。试剂盒包含大肠杆菌表达重组大鼠FBXO32和针对重组蛋白产生的抗体。使用天然大鼠FBXO32获得的结果显示出与使用重组标准品获得的标准曲线平行的线性曲线。这些结果表明，该试剂盒可用于测定天然大鼠FBXO32的相对质量值。
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物FBXO32，孵育清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色液后，若样本中有待测物则显蓝色，则加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中FBXO32的浓度。
双抗体夹心模式图
按操作顺序形成抗体夹心结构后，加入TMB 底物，板孔液体由无色变成蓝色，再加入终止液变为黄色后进行吸光度值测定。
检测实验的局限性
仅供科研使用，不能用于临床诊断或治疗。
试剂盒的使用期限不得超过试剂盒标签上的有效期。不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合使用或替换使用。
如果样品产生的值高于最高标准，则用测定稀释剂进一步稀释样品，并重复测定。稀释剂、实验员、移液技术、洗涤技术、培养时间或温度以及试剂盒使用年限的任何变化都可能导致结合变化。
样本采集、处理和存储的变化可能会导致样本值的差异。
本试剂盒实验设计消除了不同生物样品中可能潜在的干扰因素的影响，但并不能涵盖所有潜在影响因素。不能排除存在其他干扰的可能性。
操作要点
混合蛋白质溶液时，应始终避免起泡。为了避免交叉污染，在添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。此外，每种试剂应单独使用容器。
确保试剂不间断地添加到板孔中。为了确保准确的结果，在孵育步骤中需要粘合好封板膜。
当使用自动洗板机时，在加入洗涤缓冲液后加入30秒的浸泡期，或者在洗涤步骤之间将板旋转180度，可以提高测定精度。
显色剂应保持无色，直到添加到板中。确保显色剂不受光线照射。显色剂应从无色变为蓝色。
应按照与显色剂相同的顺序将终止液添加到板中。加入终止液后，孔中形成的颜色将从蓝色变为黄色。绿色的孔表示终止液未与基质溶液充分混合。
试剂盒组成及储存条件
需要的其他材料
酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
移液器及枪头；
蒸馏水或去离子水
100-1000 mL刻度量筒。
洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机。
水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度。
用于稀释标准品和样品的试管。
注意事项
此试剂盒提供的终止液为稀硫酸溶液，具有一定腐蚀性，应谨慎操作。
该试剂盒中的某些成分含有防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
显色剂B可能会引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
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