简介
苹果酸脱氢酶 1，也被称为 MDH1，是由MDH1 基因编码的酶。苹果酸脱氢酶利用柠檬酸循环中的 NAD/NADH 辅助因子系统，催化苹果酸盐的可逆氧化成草酰乙酸。该基因编码的蛋白质定位于细胞质上，可能在苹果酸-天冬氨酸穿梭中起关键作用，该穿梭在细胞质基质和线粒体之间的代谢协调中起作用。它的乙酰化激活其酶活性并增强 NADPH 的细胞内水平，从而促进脂肪生成分化。精氨酸 248（R248）的甲基化对MDH1 有负面调节。蛋白质精氨酸甲基转移酶 4（PRMT4/CARM1）甲基化并通过破坏其二聚化来抑制MDH1。它的精氨酸甲基化抑制线粒体呼吸并抑制谷氨酰胺利用。CARM1介导的 MDH1 甲基化降低细胞 NADPH 水平并使细胞对氧化应激敏感。此外，MDH1 甲基化抑制细胞生长和克隆活性。它的R248 在胰腺导管腺癌中低甲基化。已经为该基因发现了编码不同亚型的剪接转录本变异。
本试剂盒小鼠MDH1免疫测定是一种三步法固相夹心ELISA，用于测量细胞培养上清液、血清和血浆中的小鼠MDH1。试剂盒包含大肠杆菌表达重组小鼠MDH1和针对重组蛋白产生的抗体。使用天然小鼠MDH1获得的结果显示出与使用重组标准品获得的标准曲线平行的线性曲线。这些结果表明，该试剂盒可用于测定天然小鼠MDH1的相对质量值。
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物MDH1，孵育清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色液后，若样本中有待测物则显蓝色，则加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中MDH1的浓度。
双抗体夹心模式图
按操作顺序形成抗体夹心结构后，加入TMB 底物，板孔液体由无色变成蓝色，再加入终止液变为黄色后进行吸光度值测定。
检测实验的局限性
仅供科研使用，不能用于临床诊断或治疗。
试剂盒的使用期限不得超过试剂盒标签上的有效期。不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合使用或替换使用。
如果样品产生的值高于最高标准，则用测定稀释剂进一步稀释样品，并重复测定。稀释剂、实验员、移液技术、洗涤技术、培养时间或温度以及试剂盒使用年限的任何变化都可能导致结合变化。
样本采集、处理和存储的变化可能会导致样本值的差异。
本试剂盒实验设计消除了不同生物样品中可能潜在的干扰因素的影响，但并不能涵盖所有潜在影响因素。不能排除存在其他干扰的可能性。
操作要点
混合蛋白质溶液时，应始终避免起泡。为了避免交叉污染，在添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。此外，每种试剂应单独使用容器。
确保试剂不间断地添加到板孔中。为了确保准确的结果，在孵育步骤中需要粘合好封板膜。
当使用自动洗板机时，在加入洗涤缓冲液后加入30秒的浸泡期，或者在洗涤步骤之间将板旋转180度，可以提高测定精度。
显色剂应保持无色，直到添加到板中。确保显色剂不受光线照射。显色剂应从无色变为蓝色。
应按照与显色剂相同的顺序将终止液添加到板中。加入终止液后，孔中形成的颜色将从蓝色变为黄色。绿色的孔表示终止液未与基质溶液充分混合。
试剂盒组成及储存条件
需要的其他材料
酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
移液器及枪头；
蒸馏水或去离子水
100-1000 mL刻度量筒。
洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机。
水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度。
用于稀释标准品和样品的试管。
注意事项
此试剂盒提供的终止液为稀硫酸溶液，具有一定腐蚀性，应谨慎操作。
该试剂盒中的某些成分含有防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
显色剂B可能会引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
| 产品简介 |
苹果酸脱氢酶 1，也被称为 MDH1，是由MDH1 基因编码的酶。苹果酸脱氢酶利用柠檬酸循环中的 NAD/NADH 辅助因子系统，催化苹果酸盐的可逆氧化成草酰乙酸。该基因编码的蛋白质定位于细胞质上，可能在苹果酸-天冬氨酸穿梭中起关键作用，该穿梭在细胞质基质和线粒体之间的代谢协调中起作用。它的乙酰化激活其酶活性并增强 NADPH 的细胞内水平，从而促进脂肪生成分化。精氨酸 248（R248）的甲基化对MDH1 有负面调节。蛋白质精氨酸甲基转移酶 4（PRMT4/CARM1）甲基化并通过破坏其二聚化来抑制MDH1。它的精氨酸甲基化抑制线粒体呼吸并抑制谷氨酰胺利用。CARM1介导的 MDH1 甲基化降低细胞 NADPH 水平并使细胞对氧化应激敏感。此外，MDH1 甲基化抑制细胞生长和克隆活性。它的R248 在胰腺导管腺癌中低甲基化。已经为该基因发现了编码不同亚型的剪接转录本变异。 |
酶联生物经过不断的实验优化和改进，积累了大量的经验，拥有专业的酶联研发团队。利用专业的酶联免疫技术自主研发的elisa试剂盒，能对血清及其它样本定量检测抗原，定性检测特异性抗体。优质的试剂，先进的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA检测的方便性、稳定性、重复性和可靠性方面都具有很大的优势。
ELISA检测技术服务内容：
1、双抗体夹心法检测抗原 2、间接法检测抗体 3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。
以上代测费，凡购买本公司试剂盒，我们免费代测！
凡购买本公司目录任何一种酶联免疫检测试剂盒，您只需将需要检测的动物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）种类和检测指标（白介素类、激素类）及标本数量（48T/96T）通知公司业务员即可。在接到客户标本当日起，现货产品一周内将检测报告交到客户手中！
欢迎各科研单位在各种项目上与我们公司开展不同层次的密切合作，以双赢求发展，共同进步，为中国检测事业的发展积累经验。
二、样本要求
在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。
液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.0-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
三、寄标本时需注明以下情况：
1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；3、联系方式；4、实验后标本是否寄回。
客户须知：
客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
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ELISA试剂盒实验中的常见问题
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无信号
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可能原因
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解决方法
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试剂添加顺序错误或试剂配制有误
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重复实验
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检查试剂配制方法
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复核试验试剂添加流程
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HRP被叠氮化合物污染
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用新鲜配制的试剂
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体用量不足
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使用推荐的抗体量
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边缘效应
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可能原因
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解决方法
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孵育温度不均衡
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孵育时使用封板胶纸
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勿在环境温度变化大的地方孵育
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显示缓慢
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可能原因
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解决方法
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酶标板未处于正确温度下
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确保使用前酶标板和试剂处于室温下
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溶液污染
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避免使用含NaN3的试剂
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高背景信号
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可能原因
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解决方法
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洗板不充分
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洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保洗涤充分
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确保在洗涤前弃掉了所有残留抗体溶液
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样品或标准品中含干扰物
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设置空白对照
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冲液受污染
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重新配制缓冲液
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板间重复性差
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可能原因
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解决方法
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洗板不充分
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将洗涤缓冲液加入孔中洗涤，确保洗涤充分
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确保已在洗涤前弃掉所有残留溶液
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孵育温度发生变化
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严格按照推荐的温度孵育
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勿在环境温度变化大的地方孵育
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操作流程改变
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严格按照相同的操作流程
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封板胶纸重复使用导致HRP残留污染
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每一步均使用新的封板胶纸
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整版读数偏低
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可能原因
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解决方法
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酶标仪波长设置不正确
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检查酶标仪参数设置
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包被的酶标板超过使用效期
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更换新批次试剂盒
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找寻抗体，试剂，细胞裂解液，试剂盒
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